不同产地广东紫珠药材苯乙醇苷类成分含量与抗氧化能力的相关性

发布时间:2019-08-29 来源: 幽默笑话 点击:

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  摘要: 采用超声提取广东紫珠中的连翘酯苷B和金石蚕苷,用HPLC法测定其含量,并考察其与抗氧化活性的相关性。色谱柱为sunfire C18 4.6 mm×250 mm色谱柱;流动相为乙腈:水(含0.1%甲酸)的溶液(18 ∶ 82);检测波长为332 nm。抗氧化活性采用DPPH法和铁氰化钾还原法测定。测定结果,广东紫珠药材中连翘酯苷B和金石蚕苷含量最高的分别来自江西武宁和萍乡芦溪,相关性分析结果表明,连翘酯苷B和金石蚕苷含量与广东紫珠抗氧化能力均有一定的正相关性。表明不同产地广东紫珠药材中连翘酯苷B和金石蚕苷的含量有显著差异;苯乙醇苷类成分为广东紫珠中主要的抗氧化成分,与自由基清除率和总还原力呈正相关。
  关键词: 广东紫珠;连翘酯苷B;金石蚕苷;抗氧化活性
  中图分类号: R284.1 文献标志码: A 文章编号:1002-1302(2016)03-0273-03
  广东紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun.)为马鞭草科紫珠属多年生落叶小灌木,茎枝以及叶入药,收录于2010版国家药典,具有收敛止血、清热解毒等作用[1]。广东紫珠以地上部位入药,其中的苯乙醇苷类成分被认为是其主要化学成分,目前,研究者从中分离到10余种该类化合物[2-3]。相关研究表明,植物中的苯乙醇苷类成分具有较好的抗氧化活性[4]。相关学者对广东紫珠的抗氧化作用进行了初步研究。结果表明,广东紫珠的各极性部位均有不同程度清除 DPPH·、OH·的能力[5]。目前,对广东紫珠药材的抗氧化活性研究还较少,苯乙醇苷类具体成分与抗氧化能力之间的相关性研究还未见报道。因此,本试验首先利用HPLC法测定了12个不同产地的广东紫珠中连翘酯苷B和金石蚕苷2种苯乙醇苷类成分,同时测定了12个不同产地广东紫珠的DPPH清除率和总还原力,并对二者数据进行了相关性分析,对广东紫珠药材的抗氧化作用进行研究,以期为更好地综合开发利用广东紫珠资源提供参考。
  1 材料与方法
  1.1 仪器
  Waters 2695高效液相色谱仪,紫外检测器2489,美国Waters公司生产;UV-752紫外分光光度计,上海光谱仪器有限公司生产;CP214型分析天平,奥豪斯仪器有限公司生产;超声清洗器,洁康超声波有限公司生产;超声波功率 120 W,频率40 kHz;RE-52旋转蒸发器,上海亚荣公司生产。
  1.2 药品
  2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)购于西格玛公司上海办事处;连翘酯苷B和金石蚕苷对照品购自南京泽朗医药有限公司,纯度经检验大于98%;乙腈为色谱纯铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、甲醇、甲酸等均为分析纯;水为娃哈哈纯净水。
  1.3 材料
  广东紫珠药材采自12个不同产地,药材来源见表1,经江西省林业科学院鉴定为马鞭草科紫珠属植物广东紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun.)的地上部分。
  1.4 方法
  1.4.1 样品溶液的制备
  1.4.1.1 对照品溶液的制备 精确称取连翘酯苷和金石蚕苷对照品各5.00 mg,置10 mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容,精确量取各标准品溶液1 mL,混匀,制得混合标准品溶液,进样前用微孔滤膜过滤,去杂质,备用。
  1.4.1.2 样品溶液的制备 取干燥广东紫珠药材,粉碎,过50目筛,精确称定2 g,置具塞锥形瓶中,加入50%乙醇20 mL,36 ℃超声提取30 min,提取2次,静置,过滤,合并2次滤液,并浓缩定容至20 mL,0.45 μm微孔滤膜过滤,备用。
  1.4.2 广东紫珠中苯乙醇苷成分含量测定 色谱条件:色谱柱为sunfire C18 4.6 mm×250 mm色谱柱;流动相为乙腈 ∶ 水(含0.1%甲酸)为18 ∶ 82;检测波长为332 nm;流速为 1 mL/min;柱温为25 ℃;进样量10 μL。
  1.4.3 抗氧化活性测定方法
  1.4.3.1 自由基清除活性测定方法(DPPH法)[6] DPPH用无水乙醇配制成0.039 4 mg/mL的溶液,置于棕色瓶中备用。取各广东紫珠药材提取液(按照“1.4.1.2”节的方法制备,并稀释至浓度为0.1 mg/mL)3 mL,加入3 mL DPPH 标准液,于517 nm波长处测得吸光值Di;以乙醇代替样品溶液做空白试验,在 517 nm处测吸光值D0;另取3 mL溶液加3 mL 乙醇测得吸光度为Dj。根据以上数据算出清除率:
  清除率=[1-(Di-Dj)/D0]×100%。
  1.4.3.2 总还原力测定法(铁氰化钾法)[7] 在2.5 mL pH值6.6磷酸缓冲溶液中加入1 mL广东紫珠样品溶液(按照“1.4.1.2”节的方法制备,并稀释至浓度为2.5 mg/mL)、2.5 mL 1% 铁氰化钾,混合物在 50 ℃恒温条件下,加热 20 min。急速冷却,加2.5 mL 10%三氯乙酸,混匀后以3 000 r/min 离心10 min。取上层清液 2.5 mL,加2.5 mL蒸馏水再加0.5 mL 0.1% FeCl3,混合均匀,静置10 min 后,在700 nm处测定吸光度。
  2 结果与分析
  2.1 广东紫珠中连翘酯苷B和金石蚕苷含量测定方法学考察
  2.1.1 标准曲线的测定 分别精确称取连翘酯苷B、金石蚕苷各5 mg,置于10 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得对照品溶液。分别精确量取1 mL,混合,得混合对照品储备液。注入高效液相色谱仪,进样体积分别为1、4、8、12、16、20 μL,测定连翘酯苷B、金石蚕苷的峰面积,分别以连翘酯苷B、金石蚕苷的量(μg)为横坐标(x),峰面积为纵坐标(y),绘制标准曲线,计算回归方程,得到连翘酯苷B的回归方程为:y=886 531x+284 290,r=0.995 1;金石蚕苷的回归方程为:y=982 413x+371 749,r=0.9995。结果表明,连翘酯苷B和金石蚕苷在0.25~5.0 μg 范围内线性关系均良好。标准品及样品HPLC图见图1、图2。

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