利用HPLC采用一测多评方法测定大黄药材中5种成分

发布时间:2019-08-29 来源: 幽默笑话 点击:


  【摘要】目的:采用高效液相色谱(HPLC)对用大黄素一种对照品检测大黄药材中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚五种成分的总量,以减少对照品的使用数目、节约资源。方法:采用HPLC日本成人电影进行分析,色谱柱:大连依利特Hypersil BDS C18柱(250×4.6mm,5?m);检测波长为254nm。流动相: 甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15),柱温25℃,检测波长为254nm,结果:用大黄素对照品测定五种成分的相对保留时间的重复性良好、仪器精密度RSD为2.5%。结论:本法简单、快捷,能够满足质量检测的需求。
  【关键词】一测多评;HPLC;大黄
  【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2015)04-0298-01
  1 仪器与试剂
  1.1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪(含在线真空脱气机,四元泵,手动进样器,柱温箱,检测器),Agilent化学工作站;岛津LC-10ADvp高效液相色谱仪,SPD-M10Avp二极管阵列检测器,岛津化学工作站。
  1.2 试剂 甲醇为色谱纯(国药集团化学试剂有限公司),其它试剂均为分析纯。大黄素对照品(批号:110766-200416)、芦荟大黄素(批号:110795-200504)、大黄酸(批号:0757-200206)、大黄素(批号:110756-200110)、大黄酚(批号:110796-200716)、大黄素甲醚(批号:110758-200610)均购于中国药品生物制品检定所,大黄药材由安徽华佗国药股份有限公司提供。
  2 方法与结果
  2.1 色谱条件 色谱柱为大连依利特公司Hypersil BDS C18(250×4.6mm,5?m);以甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15)为流动相;检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
  2.2 对照品、供试品溶液的制备
  2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量,加甲醇分别制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80μg,大黄素甲醚40μg的溶液;分别精密量取上述对照品溶液各2ml,混匀,即得(每1ml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg,含大黄素甲醚8μg) [1]。
  2.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约0.15g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液5ml,置烧瓶中,挥去溶剂,加8%盐酸溶液10ml,超声处理2分钟,再加三氯甲烷10ml,加热回流1小时,放冷,置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗涤容器,并入分液漏斗中,分取三氯甲烷层,酸液再用三氯甲烷提取3次,每次10ml,合并三氯甲烷液,减压回收溶剂至干,残渣加甲醇使溶解,转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得[1]。
  测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,以大黄素对照品的峰面积为对照,分别计算芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量,用待测成分色谱峰与大黄素色谱峰的相对保留时间确定。
  2.3精密度试验 分别精密吸取大黄素对照品溶液,连续进样5次,每次10μl,按上述实验方法项下的色谱条件测定,结果每次峰面积的RSD为2.5%,表明本方法仪器精密度良好。
  2.4 重复性试验 按供试品溶液的制备方法处理10批样品,采用不同高效液相色谱仪,按上述色谱条件分别测定,记录色谱图,以大黄素色谱峰,计算5种成分的相对保留时间的平均值为:芦荟大黄素0.52、大黄酸0.67、大黄素1.0、大黄酚1.38和大黄素甲醚2.01。结果每种成分相对保留时间都<4%,表明各共有峰的相对保留时间稳定,表明本方法重复性良好。
  2.4 样品含量测定 采用不同高效液相色谱仪测定,按上述处理和计算方法与中国药典2010年版一部比较,计算5批大黄药材中五种成分的总量结果见下表2。
  3 讨论
  3.1采用一种对照品测定两种及两种以上成分的测定方法即一测多评(一标多测)。一测多评(一标多测)日本成人电影首次在中国药典2010年版一部“黄连”药材中采用,仅“黄连”药材含量测定项采用此方法[2],即用盐酸小檗碱一种对照品测定盐酸小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀四种成分的含量。
  表2 5批大黄药材含量测定结果比较
  Tab.1 5 batches of assay results compared medicinal rhubarb
  结果批 号average
  01010102020103010302
  药典方法计算(%)1.811.721.831.501.671.71
  本文方法计算(%)2.001.952.031.681.891.91
  本文比药典方法高出(%)10.513.410.912.013.112.0
  3.2 计算结果 以本文的方法与中国药典2010年版做了比较,结果使用本文方法比中国药典计算高出约12%,如果大黄药材采用本文方法计算,标准限度可提高为1.68%,基本与现在的中国药典方法的限度1.5%相当。
  3.3 色谱条件、对照品和供试品溶液的制备 由于完全选用中国药典2010年版一部大黄药材(P22)项下含量测定中的色谱条件、对照品和供试品溶液的制备方法,所以没有再考察线性关系、样品溶液的稳定性、加样回收;主要考察了仪器的精密度、采用不同高效液相色谱仪的相对保留时间的重复性、本方法的含量计算结果的重复性。
  参考文献:
  1 ChP(中国药典).2010.Vol(一部):22
  2 ChP(中国药典).2010.Vol(一部):285

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